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产品介绍
本试剂盒应用于免疫印迹实验，以化学发光法检测蛋白质。本产品发光液极其灵敏，发光信号持久，稳定性更好，不含有毒试剂，安全性更高。
本试剂盒包含增强型的鲁米诺底物和稳定的过氧化物体系，在灵敏度检测方面有显著提升，能检测低至飞克级的微量蛋白。其工作原理是：以辣根过氧化物酶（HRP）标记的抗体直接或间接结合膜上的目的蛋白，在洗膜后加入ECL 工作液，在其碱性环境下，鲁米诺由 HRP 催化发光，然后可用X光胶片曝光，也可以直接进行CCD扫描拍照。
使用方法
- 为了获得最佳效果，工作液最好在临近使用前配制并立即使用。配置工作液时务必更换吸头，以免污染试剂。
- 准备ECL工作液：将 A液 和 B液 按等体积比例 1:1 混合 。推荐使用剂量：0.1ml工作液/cm2膜。
- 用平头镊子取出洗好的膜，沥干膜上洗膜液，但不要让膜干燥。 将结合有蛋白的一面朝上，放置于洁净保鲜膜上。
- 加上配好的ECL工作液，孵育时确保工作液覆盖整张膜，室温孵育1-2min。
- 用平头镊夹起印迹膜，弃去印迹膜上ECL工作液，将一张洁净的保鲜膜平整的铺在印迹膜上，结合有蛋白的一面朝上。
- 将处理好的印迹膜置于X光片盒中，在暗室中取一张胶片小心置于膜上，曝光时间取决于膜上的发光强度，曝光后立即显影定影，或将印迹膜放置到荧光成像仪内，按仪器说明书进行检测。
| 遇到的问题 | 原因分析 | 推荐解决方法 |
| 胶片出现反影 | 反应系统中 HRP 量过多 | 稀释 HRP 标记物 |
| 膜上出现棕色或黄色条带 | ||
| 暗室中观察到强烈发光 | ||
| 条带有空斑 | ||
| 发光信号持续时间短 | 保鲜膜、显影液或定影液污染 | 养成良好的实验习惯 |
| 反应系统中 HRP 量过少 | 增加 HRP 标记物 | |
| 胶片无条带显现或者信 号较弱 | 转膜的效率低 | 提高转膜效率，用预染 Marker判断。 |
| 抗原、抗体量少或不匹配 | 增加抗原/抗体量或选择合适抗原 /抗体 | |
| X光胶片有问题 | 曝光后 X 光谱全黑（而非透明 色），则表明胶片已完全曝光使用新的 X 光片 | |
| 显影/定影液有问题 | 可预先曝光一张胶片进行判断，如有问题当换用新的显影/定影液 | |
| 高背景 | 反应系统中 HRP 量过多 | 稀释 HRP 标记物，延长封闭时间 |
| 抗体未清洗干净 | 增加洗膜次数 | |
| 封闭不完全 | 优化封闭条件 | |
| 使用错误的封闭剂 | 使用其他的封闭剂 | |
| 过度曝光 | 降低曝光时间 | |
| 高背景 | 高浓度的抗体 | 进一步稀释一抗和二抗，优化抗体稀释度 |
| 低效的阻断 | 增加Tween-20的TBST缓冲液，增加脱脂奶粉阻断缓冲液浓度 | |
| 洗涤不充分 | 增加洗涤液体积，或者多增加洗涤次数和时间 | |
| 一抗的质量 | 抗体自身的质量问题，或重新稀释新的一抗。 | |
| 缓冲液污染 | 检测缓冲液颗粒或细菌不纯物，或更换旧的缓冲液 | |
| 非特异性条带 | 一抗用量过多或者特异性较差 | 减少一抗稀释比例或者更换一抗 |
| SDS 引起蛋白非特异性结合 | 实验流程中避免使用 SDS | |
| 不规则的黑点 | 膜上含有气泡 | 轻轻将气泡移除 |
| 被污染的设备 | 蛋白质或残留的凝胶块可能会粘到膜上，抗体被困在其中，因洗涤不佳,造成局部信号 | |
| 样品与膜相互作用 | 始终用干净的塑料托盘，避免任何类型的交叉污染 |
