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无蛋白快速封闭液
产品介绍
快速封闭液是一种即用型，高效快速应用于 Western Blot 等实验的封闭液。封闭 时间仅需 10 分钟，效果优于脱脂奶粉、BSA、酪蛋白等传统封闭液，获得更高的信号，更低的背景值，信噪 比高。该试剂不含有哺乳动物来源的蛋白成分，避免与抗体发生交叉反应，适用于磷酸化的抗体，但不可用 于生物素标记的抗体。
产品特色
即用型封闭液，无需配制
封闭时间短，仅需 10 分钟
背景低，信噪比高，优于常规奶粉等封闭的效果
不含哺乳动物来源的蛋白，适用于磷酸化的抗体
操作步骤
1. 完成转膜后，将膜移入到平皿或者其他适合的容器中（可以不洗涤膜）。
2. 根据膜的大小，加入适量体积的Blot Blocking Buffer 封闭液，需完全浸没覆盖膜，对于 7.5x 8cm 的膜推荐使用量 5-10ml。
3. 置于水平摇床上，室温条件下振荡孵育 10 分钟。
4. 取出封闭完成的膜，用洗涤液/TBST冲洗蛋白膜 2-3 次，即可用于一抗孵育等后续 western blot 实验。
保存条件
4℃保存，冰袋运输，至少 1 年有效；
注意事项
1. 通常用于 PVDF 膜或 NC 膜的封闭时间为 10 分钟。对于背景低的抗体，可以缩短到 5 分钟，而对于一些背景 非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为 30-60 分钟。
2. 没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验或抗体，可能需要具体情况考虑使 用其它更合适的封闭液，比如奶粉、BSA 等封闭试剂。
3. 信号弱或者无信号：有可能是上样量不足；转膜效率低；抗体效价低，特异性差等原因造成，需要根据实验 情况进行调整
4. 背景高：有可能是抗体使用量过多；蛋白膜洗涤时间不足；抗体和封闭液发生交叉反应；试剂或仪器设备被 污染等原因造成，需要根据实验具体情况进行调整。
5. 本产品仅限于科研使用，实验时请穿实验服并戴一次性手套操作。
快递封闭液 常见问题
Q：使用 MF0505 快速封闭液，按照 10 分钟封闭，TSBT 清洗了两次，每次 5 分钟，曝光背景比较黑，怎么办？
A：延长封闭时间（20-30 分钟）或降低蛋白上样量原因如下：其实 WB 实验的真正技术是包含了两个知识点：第一是 SDS-PAGE 技术让目标蛋白和杂蛋白全部变性，在电势能的作用下依据分子量的大小分离开，最后压缩成带。因此你加样量太大，超过凝胶的承载能力和电泳 Buffer 的缓冲能力，导致分离不完全，背景加深等等现象。第二是转膜后用免疫沉淀技术将很微量的结合了一抗的目标蛋白与二抗结合放大信号（用 ECL 可以检测到 1ng）。因此你目标抗原抗体复合物与二抗的比例就是一个关键问题，由于你样品含量高超过了免疫沉淀的最佳比例，直接导致你的目标区域没有条带，而背景由于比例适当反而大面积显色形成空心的负片效应。所以，降低加样量，调整一抗二抗的比例，用内参重新做预实验。
Q：曝光背景有杂带，且看不到主带怎么办？
A：建议更换脱脂奶粉或者抗体品牌重新做，没有任何一种快速封闭液可以通用于所有的蛋白，快速封闭液为科研工作者提供了高效方法，但碰到及个别的情况还是需要用脱脂奶粉或 BSA 采用传统时间来封闭。
Q：背景还可以，主带有些弱或看不清主带
A：建议 5 分钟封闭或者换一种灵敏度更高的发光液
