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基于重组原理的无缝克隆技术，作为新一代的克隆方法，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，也不需要末端补平等操作，依据 DNA 片段与线性化载体末端的 15~25 nt 同源序列的重组，可将插入片段克隆至任意线性载体的任意位点，载体自连背景极低，是一种简单、快速、高效的 DNA 定向克隆技术。
本品一次反应可完成1-5个 DNA 片段的重组，最快仅需 5 分钟即可完成单片段重组，且阳性率高于 95%。2×Uniclone Seamless Cloning Mix 中添加的辅助因子和优化的反应体系使产品具有更高的阳性率和兼容性。
常见问题
转化效率低：
感受态效率低下：使用新制备或妥善保存的感受态细胞。
DNA 片段比例不佳：按照说明书推荐的最适用量和比例配制反应体系。载体和插入片段的浓度测定：若线性化载体与插入片段已经过纯化，且经电泳检测条带单一或无 Smear 残留时，可使用超微量核酸蛋白检测仪等基于分光光度法的仪器进行浓度测定，但只有当 A260/A280 在 1.8~2.0 之间时浓度值可信；若线性化载体与插入片段未经过纯化，也可使用琼脂糖电泳测定样品浓度。
DNA 片段纯度不够： 对载体和插入片段进行胶回收纯化。由于 EDTA 等金属离子螯合剂会抑制无缝克隆反应，因此纯化产物应溶解于 ddH2O 中，切勿使用 Tris-EDTA 等缓冲液。
反应产物过量： 在转化体系中，无缝克隆反应产物体积不应超过感受态细胞体积的 10%。
大量克隆不含 插入片段
载体线性化不完全：酶切制备线性化载体时，提高快速内切酶的使用量，延长反应时间，使用胶回收纯化酶切产物。
相同抗性质粒污染：以质粒为模板进行插入片段 PCR 扩增时，使用预线性化质粒作为扩增模板，使用 DpnI 等甲基化敏感型内切酶对扩增产物进行处理，或对产物进行胶回收纯化。
平板抗性不足：确保使用正确的抗生素，并使用新鲜制备的抗生素平板。
大量克隆含有不正确插入片段
非特异性 PCR 扩增产物：优化 PCR 体系，提高扩增特异性，或胶回收纯化 PCR 产物重叠序列的扩增引物。
本产品仅供科研使用。
