Trizol 是一种用于各种动植物组织、细菌、细胞、全血、病毒液总 RNA 抽 提试剂,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,并有效抑制样本中 RNA 的降解,保持 RNA 的完整性。样品在该试剂中能够充分裂解,之后加入氯仿离心分层,形 成上清层、中间层和有机层(红色下层),RNA 分布在上层水相中,收集上清层后,经异丙 醇沉淀便可得到总 RNA。提取的总 RNA 纯度高,基本不含蛋白质及基因组 DNA,可直接 用于 Northern、点杂交、mRNA 纯化、体外翻译、RT-PCR、poly(A)+选择、RNA 酶保护分析 以及构建 cDNA 文库等多种分子生物学实验。
此外,样品中的 DNA 和蛋白也能以沉淀的方式还原。乙醇沉淀能析出中间层的 DNA, 而在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白。
Trizol 试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种 RNA 的析出。例如,从大鼠肝脏 抽提的 RNA 琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙锭染色,可见许多介于 7 kb 和 15 kb 之间不连续的 高分子量条带(mRNA 和 hnRNA 成分),两条优势核糖体约 5 kb(28S)和约 2 kb(18S), 低分子量 RNA 介于 0.1 和 0.3 kb 之间(tRNA,5S),当抽提的 RNA 用 TE 稀释时其 A260/A280 比值≧1.8。
注意事项
1. 需自备氯仿、异丙醇、75%乙醇、RNase-free H2O。
2. 样品用 Trizol匀浆后,在加入氯仿前,可在-70℃冻存一个月以上(注意正确操作是样品充分裂解之后再冻存)。
3. RNA 沉淀在 75%乙醇中,4℃可保存 1 周,-20℃可保存 1 年。
样品处理与保存:
贴壁细胞直接倒出培养液,用PBS洗一次,直接加Trizol,用*反复吹打,至裂解液中无明显沉淀,
静置5min后,直接把它冻在-20就行,一般冻一周没问题,提出来也很好;